虫草工艺

1. 菌种制备

1.1培养基及工器具的准备

1.1.1将称量好的培养溶解后分装于500毫升锥形培养瓶中

1.1.2培养基分装好以后进行灭菌；灭菌温度：115℃ 、灭菌时间：20分钟

1.1.3将接种用的器具灭菌；灭菌温度：121℃ 、灭菌时间：30分钟

1.1.4培养基及器具灭菌后放到超净工作台内备用（培养基不可用紫外灯光照射）

1.2接种

1.2.1将保存于2—8℃的菌种取出，用75%的乙醇溶液擦拭试管表面后放在工作台内准备接种。

1.2.2戴好无菌手套后拿起接种针将针环用酒精灯火焰将其烧红，冷却后将试管内菌种挑取1毫米大小片状菌块，然后接种于已灭菌备用的培养基中。

1.2.3将培养瓶编号以后放入恒温震荡培养箱内进行活化；活化温度：26℃、活化转数：180转／每分钟、活化天数：4—7天

1.2.4菌种活化状态：当培养基的颜色慢慢变浅（颜色变化由开始的深棕色转变成白色浑浊状），培养基粘稠度慢慢变重（培养基粘稠度慢慢增加）

1.2.5菌种传代：将活化完成后的菌种从培养瓶中按照培养体积的6%接种于准备好的培养瓶中继续培养。（一般培养到3代后便可以作为种子继续培养）

2. 菌种100L种子罐培养

2.1将种子罐需要的培养基称量好后在种子罐内进行灭菌；灭菌温度：115℃、灭菌时间：20分钟

2.1接种：将培养好的菌种接种于种子罐内继续培养；培养温度26摄氏度、培养转数180转、培养PH值6.8—7.0、培养溶氧值30%以上、培养天数3天

2.2培养状态：培养状态基本和摇瓶是一致的

3. 菌种500L发酵罐培养

3.1培养基灭菌：灭菌温度：115℃、灭菌时间：20分钟

3.2转种：将种子罐内的菌种转接到500L发酵罐内继续培养，培养参数与2.1相同。

4. 菌体收集

4.1钛棒过滤器准备：将钛棒安装于菌体收集箱体内，连接上洁净的压缩空气，是菌液在箱体内受到压缩空气的作用力，通过钛棒将培养基过滤出去；将钛棒过滤器的进液口连接在发酵罐的排液口上进行收集工作。

4.2收集：将钛棒卸下，利用菌体收集铲将钛棒表面的菌体收集下来，并平整的铺在冻干盘中，准备冻干

5. 菌体冻干收集

6. 菌体粉碎

6.1菌体的准备：将冻干后收集的菌体用无菌药袋分装好，并传递到粉碎室等待粉碎

6.2菌体粉碎：将粉碎机电源接通后，开启粉碎机运行几分钟后，将工作频率调至50赫兹，然后打开投料口慢慢的将菌体投入；粉碎40分钟—1小时后收集菌体，将收集下来的菌体用药袋收集后称重并传递到混合室。

7. 菌体批混

7.1菌体混合：将粉碎后的菌体逐袋投入到混合机混合料斗内，封闭好投料口以及出料口阀片，将设备调至8-10转每分钟，混合10分钟后停止设备，打开放料口收集物料。